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高效液相色谱仪使用方法通用版

发布日期:2017-12-14 14:56:20

 

1、开机设定参数(检测波长、流速),更换所需流动相,检查色谱柱是否正确。
2、排液置换管路中流动相,冲洗进样阀,洗好进样针。
3、冲洗色谱柱进行平衡,其间可提前进行样品的处理,样品信息的注册。
4、平衡好以后进空白试验,排除系统污染。
5、柱子稳定好以后进样,等待运行结束(其间清洗进样针),积分计算,出具报告。

详细操作步骤如下:

1、 开机操作:
(1)、打开电源,用Harb相连接时,注意Harb电源,打开计算机,打开Bootp Server(一般启动时已打开);
(2)、自上而下打开个组件电源,Bootp Server里显示有信号时(有六行字符),打开工作站(先打开On line);
(3)、打开冲洗泵头的10%异丙醇溶液的开关(需用针捅抽),控制流量大小,以能流出的最小流量为准;
(4)、注意各流动相所剩溶液的容积设定,若设定的容积低于最低限会自动停泵,注意洗泵溶液的体积,及时加液;
(5)、使用过程中要经常观察仪器工作状态,及时正确处理各种突发事件。
2、 先以所用流动相冲洗系统一定时间(如所用流动相为含盐流动相,必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相),正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯,以延长灯的使用寿命;
3、 建立色谱操作方法,注意保存为自己命名的Method,勿覆盖或删除他人的方法及实验结果;
4、 使用手动进样器进样时,在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒,洗针液一般选择与样品液一致的溶剂,进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上,并排除针筒中的气泡;
5、 溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎,在更换流动相时注意保护,当发现过滤头变脏或长菌时,不可用超声洗涤,可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤;
6、 实验结束后,一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上,再用甲醇冲洗。冲洗过程中关闭D灯、W灯;
7、 关机时,先关闭泵、检测器等,再关闭工作站,然后关机,最后自下而上关闭色谱仪各组件,关闭洗泵溶液的开关;
8、 使用者须认真履行仪器使用登记制度,不要擅自拆卸仪器。

流动相:
1、 流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水,酸碱液及缓冲液需经过滤后使用,过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围;
2、 水相流动相需经常更换(一般不超过2天),防止长菌变质;
3、 使用双泵时,A、B、C、D四相中,若所用流动相中有含盐流动相,则A、D(进液口位于混合器下方)放置含盐流动相,B、C(进液口位于混合器上方)放置不含盐流动相;
A、B、C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶,用于存放水相流动相。
样品:
1、 采用过滤或离心方法处理样品,确保样品中不含固体颗粒;
2、 用流动相或比流动相弱(若为反相柱,则极性比流动相大;若为正相柱,则极性比流动相小)的溶剂制备样品溶液,尽量用流动相制备样品液;
手动进样时,进样量尽量小,使用定量管定量时,进样体积应为定量管的3~5倍;
色谱柱:
1、 使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书,注意适用范围,如pH值范围、流动相类型等;
2、 使用符合要求的流动相;
3、 使用保护柱;
4、 如所用流动相为含盐流动相,反相色谱柱使用后,先用水或低浓度甲醇水(如5%甲醇水溶液),再用甲醇冲洗。
5、 色谱柱在不使用时,应用甲醇冲洗,取下后紧密封闭两端保存;
6、 不要高压冲洗柱子;
7、 不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱;

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